دستورالعمل روش انجام آزمایش T-Uptake با متد EIA

کد سند:
کد یکتا:
20
واحد سازمانی:
هورمون شناسی
فرآیند:
فرآیند انجام آزمایش
زمان ویرایش:
1395/01/24
ویرایش کننده:
مدیر ارشد آزمایشگاه
شماره بازنگری:
3.0
ضمیمه - مرجع:
توضیحات:

متن سند:
هدف

 اطمینان از تعیین صحیح میزان T-Uptakeدر خون بیماران بر اساس روش Enzyme Immuno Assay (EIA) است .
 
دامنه کاربرد:

این دستورالعمل  جهت اندازه گیری کمی آنالیت T-UPTAKE در نمونه سرم یا پلاسمای انسان به طریقه  Manual در بخش هورمون آزمایشگاه کاربرد دارد .
 
اقدامات وابسته :

-آگاهی از اساس آزمایش T-Uptake به روش EIA
-آگاهی از محدوده رفرانس آنالیت T-Uptake در سرم  یا پلاسما و همچنین تغییر مقدار آنالیت در بیماری و شرایط مختلف
-آگاهی از برنامه کنترل کیفی آزمایشگاه
-آگاهی از خطاهای تکنیکی و بروز Cross - Reaction
-آشنایی با اپراتوری و تحلیل نتایج دریافت شده از دستگاه
-آگاهی از اصول ایمنی در آزمایشگاه و دستورالعمل های دفع پسماند  
 
اطلاعات نمونه :

نوع نمونه : نمونه سرم یا پلاسمای هپارینه یا EDTA
شرایط ظاهری نمونه :

-نمونه سرم یا پلاسمای کاملاً همولیز ، لیپمیک و یا ایکتریک فاقد اعتبار لازم جهت انجام آزمایش است .
-نمونه باید شفاف و فاقد هر گونه ذارت معلق (به صورت Clot و یا رشته های فیبرین ) بوده ، که در غیر این صورت نمونه باید سانتریفیوژ گردد.
-حجم نمونه : حداقل حجم مورد نیاز برای سنجش T-Uptake مقدار 25  میکرولیتر می باشد.
-نحوه ذخیره سازی نمونه :
-ذخیره سازی نمونه در دمای 2-8°c به مدت48 ساعت
-ذخیره سازی نمونه در دمای -20°c  به مدت 7 روز
-توجه : نمونه های ذخیره شده در فریز بعد از دفریز شدن و همچنین نمونه های دریافتی از آزمایشگاه های ارجاع دهنده باید توسط ورتکس، همگن شوند.
-توجه : از فریز کردن نمونه هایی که قبلاً دفریز شده اند به شدت اجتناب شود .
 
تجهیزات و لوازم مورد نیاز :

-کیت مورد نظر ساخت شرکت پیشتاز طب زمان
-دستگاه Elisa Reader
-دستگاه Elisa Washer
-سمپلر 100  و 50 و 25 میکرولیتر کالیبر همراه با سر سمپلرهای نو یکبار مصرف مناسب
 
اساس انجام تست T-Uptake به روش EIA :

اساس این روش بر روش سنجش رقابتی استوار است .
روش رقابتی یا مهاری برای آنتی ژن:
اساس این روش بر رقابت بین آنتی ژن نشاندار و آنتی ژن موجود در نمونه برای اتصال به یک آنتی بادی اختصاصی کوت شده در چاهک استوار است . در این روش مقدار آنتی بادی کوت شده باید محدود باشد و ملکول سیگنال دهنده همان آنتی ژن نشاندار است 

روش انجام آزمایش :

نکاتی که قبل از انجام آزمایش باید رعایت شود :
قبل از شروع مراحل آزمایش تمام مواد و نمونه ها را به درجه حرارت اتاق برسانید  :
بهتر است به محض شروع آزمایش کلیه مراحل بدون توقف انجام پذیرند.
از نوک سمپلر یک بار مصرف برای هر نمونه استفاده کنید .
پس از افزودن محلول متوقف کننده جذب نوری چاهک ها حداکثر تا نیم ساعت قابل قرائت می باشد .
برای کسب نتایج مطلوب باید شستشوی چاهک ها بصورت کامل صورت گرفته و آخرین قطرات پس از شستشو از چاهک ها تخلیه شود .
در هنگام سمپلینگ ، تمام محلول ها و نمونه ها را در وسط چاهک ها نریزید.
از مهمترین فاکتورها در حصول نتیجه مطلوب ، زمان انکوباسیون مناسب می باشد، بنابراین بهتر است قبل از شروع آزمایش ، تمام مواد و محلول های مورد نیاز آماده و درب تمام محلول را باز نمایید ، این محلول با کاهش فاصله زمانی بین مراحل سمپلینگ باعث نتایج دقیقتر می شود .
بنا به دلایل ذکر شده در بند قبل بهتر است که حجم انجام تست محدود باشد و زمان ریختن نمونه ها بیش از 5 دقیقه بطول نیانجامد.

مراحل انجام آزمایش

-تعداد چاهک های مورد نظر را انتخاب نموده و باقی چاهک ها را به همراه رطوبت گیر درون کیسه مخصوص نگهداری پلیت قرار داده و درب آن را ببندید .
-25 میکرو لیتر از هر استاندارد ، سرم کنترل و نمونه را به داخل هر چاهک بریزید.
-50 میکرو لیتر Assay buffer و در پی آن 50 میکرولیتر  آنزیم کونژوگه در داخل چاهک ها ریخته و برای مدت 15 ثانیه بلیت را تکان دهید تا ----محتویات چاهک ها خوب مخلوط شوند . سپس درب چاهک ها را بر چسب بپوشانید.
-انکوباسیون پلیت به مدت 1 ساعت در دمای اتاق ( 28-22 درجه سانتی گراد)
-شستشوی چاهک ها : 5 بار چاهک ها را توسط محلول شستشوی رقیق شده بشویید و در انتهای عملیات شستشو چاهک ها را در حالت وارونه و با ضربات ملایم روی یک پارچه یا کاغذ نمگیر بکوبید تا قطرات اضافی آن خارج شود.
-افزودن 100 میکرولیتر محلول رنگزا (Chromogen – Substrate) به چاهک ها .
-انکوباسیون به مدت 15 دقیقه در درجه حرارت اتاق و در تاریکی
-افزودن 100 میکرو لیتر محلول متوقف کننده (Stop Solution) به هر چاهک.
-خوانش جذب نوری چاهک ها توسط Elisa Reader با طول موج 450 nm.

محدودیت ها : 

-از در هم آمیختن ریجنت های با Lot NO#  مختلف خودداری کنید .
-از مصرف کردن کیت هایی با تاریخ انقضای گذشته خودداری کنید .
-برای بدست آوردن نتایج قابل اعتماد به آموزش دقیق و تکنیک ماهرانه نیاز است .
-آلودگی با کتریال نمونه سرم ممکن است بر روی نتایج تاثیر گذارد.
 
علل رد نمونه
-نامناسب بودن نمونه از نظر نوع و حجم
-وجود عوامل مداخله گر در نمونه همانند نمونه هایی که همولیز یا همراه گلبول قرمز هستند و نمونه هایی که لیپمیک و یا ایکتریک هستند در حدی که نتایج را تحت تاثیر قرار دهند .
-وجود فیبرین در سرم
-نمونه گیری غیر صحیح از بیماران (به عنوان مثال از همان دستی خونگیری شود که در حال دریافت سرم است )
-عدم درج مشخصات لازم روی برچسب نمونه
 
نکات ایمنی 

-در هنگام استفاده از دستگاه Elisa Washer  و Elisa Reader  می بایست کلیه نکات ایمنی مربوط به وسایل الکتریکی را رعایت نمایید .
-دو شاخه دستگاه را حتما به پریز ارت دار متصل نمایید.
-از هرگونه خوردن و آشامیدن و کشیدن سیگار در آزمایشگاه خودداری نمایید .
-از هرگونه تماس مستقیم با مواد بالقوه عفونت زا با استفاده از پوشش محافظ نظیر روپوش آزمایشگاه ، عینک های محافظ و دستکش های یک بار مصرف ، جلوگیری کنید .
-از پاشیدن و پراکنده کردن آئروسل ها خودداری نمایید .
-هرگونه ریجنت و محلول ریخته شده روی سطوح را توسط محلول هیپوکلریت سدیم 5%  ، ضد عفونی کنید .
 
اشکال یابی :
برخی از Error های شایع دستگاه عبارتند از :
-کاهش فعالیت ردیاب


ادامه دارد ...

 

فرهیخته آزمایشگاهی گرامی:

با سلام و درود

احتراما با تشکر از بازدید  شما از نسخه دموی نرم افزار استانداردسازی و کنترل کیفیت    NextLab 

معروض میدارد امکان رویت متن کامل مستندات فقط در لینک های زیر میسر است

و دسترسی به متن کامل سایر مستندات فقط در نسخه اصلی امکان پذیر است

دستورالعمل مدیریت پسماندها

دستورالعمل کاربری دستگاه سل کانتر

دستورالعمل روش انجام آزمایش CBC

شرح وظايف کارکنان نظافت، شستشو و استرلیزاسیون

روش اجرانی ممیزی داخلی

دستورالعمل آماده سازي و اطلاع رساني بيماران جهت نمونه گيري صحيح


با سپاس از بذل توجه شما


نرم افزار مستندات، استانداردسازی و کنترل کیفیت نِکست لَب [ www.NextLab.ir ]